2013-08-21
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液相色譜儀常見(jiàn)故障分析及解決要點(diǎn)
既使日常精心維護(hù)的液相色譜儀，隨著使用時(shí)間的增加或使用者經(jīng)驗(yàn)不足也會(huì)出現(xiàn)一些問(wèn)題或故障。樣品中溶劑出峰時(shí)，使用流動(dòng)相作樣品的 溶劑;出現(xiàn)進(jìn)樣閥殘余峰時(shí)，使用強(qiáng)溶劑清洗進(jìn)樣閥，并改進(jìn)閥和樣品的清洗程序;流動(dòng)相用水不合格率，應(yīng)使用HPLC級(jí)的水。
既使日常精心維護(hù)的液相色譜儀，隨著使用時(shí)間的增加或使用者經(jīng)驗(yàn)不足也會(huì)出現(xiàn)一些問(wèn)題或故障。現(xiàn)將液相色譜儀容易出現(xiàn)的故障及解決辦法介紹如下：
1.保留時(shí)間變化
保留時(shí)間的變化有三中情況：波動(dòng)、縮短、延長(zhǎng)。
保留時(shí)間出現(xiàn)波動(dòng)時(shí)，應(yīng)檢查柱溫是否處于恒溫狀態(tài)，如果設(shè)置為室溫，氣溫的變化
會(huì)引起保留時(shí)間的波動(dòng)，應(yīng)該設(shè)置為恒定溫度;等度和梯度間還沒(méi)有充分達(dá)到平衡狀態(tài)時(shí)，應(yīng)該用十倍以上柱體積的流動(dòng)相去平衡色譜柱;緩沖液濃度太低時(shí)，應(yīng)換用>25mmol/L的緩沖液;色譜柱被污染或已經(jīng)接近柱壽命時(shí)，應(yīng)更換保護(hù)柱或換新色譜柱。
保留時(shí)間縮短時(shí)，流速增加，應(yīng)檢查流速的設(shè)定;柱溫高時(shí)，應(yīng)檢查柱的設(shè)置;進(jìn)樣量太大時(shí)，減少樣品用量或降低樣品濃度;流動(dòng)相的組成發(fā)生了改變，比如流動(dòng)相中易揮發(fā)有機(jī)相蒸發(fā)，兩相之間互溶不好，會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀;流動(dòng)相的PH值應(yīng)保持3~7.5范圍內(nèi)，否則會(huì)引起柱鍵合相的流失。
保留時(shí)間延長(zhǎng)時(shí)，流速減小，應(yīng)檢查流速的設(shè)定和管路是否有泄露;柱溫低時(shí)，檢查
柱溫的設(shè)置;流動(dòng)相的組成發(fā)生了改變，比如流動(dòng)相中易揮發(fā)有機(jī)相蒸發(fā)，兩相之間互溶不好，會(huì)導(dǎo)致流動(dòng)相不均勻或某一相出現(xiàn)部分沉淀;檢查流動(dòng)相的pH值是否3~7.5范圍內(nèi)，否則會(huì)引起柱鍵合相的流失。
2.峰拖尾
色譜柱超載時(shí)，要減少進(jìn)樣量或稀釋樣品或使用高溶量的色譜柱;色譜柱性能不佳時(shí)，更換色譜柱;死體積或柱外體積過(guò)大時(shí)，將連接降至zui低，并對(duì)所有連接點(diǎn)作合理的調(diào)整，盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接;加入硅羥基，其作用是純化色譜柱，增加緩沖液的濃度，降低流動(dòng)相的pH值，純化樣品;出現(xiàn)峰干擾時(shí)，應(yīng)清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相。
3.峰展寬
進(jìn)樣體積過(guò)大時(shí)，用流動(dòng)相配樣;樣品過(guò)載時(shí)，進(jìn)小濃度、小體積樣品;在進(jìn)樣閥中
造成峰擴(kuò)展時(shí)，進(jìn)樣前后排出氣泡，以降低擴(kuò)散;流動(dòng)相粘度過(guò)高時(shí)，提高柱溫，并采用低粘度流動(dòng)相;等度洗脫，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，要增加流速或改用梯度洗脫;柱外體積過(guò)大時(shí)，[1]將連接管徑和連結(jié)管降至zui小。
4.基線噪聲
流動(dòng)相或檢測(cè)器中有氣泡時(shí)，要對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理;檢測(cè)器燈有連續(xù)噪聲時(shí)，更
換氘燈;出現(xiàn)由污染引起的隨機(jī)噪聲時(shí)，應(yīng)清洗色譜柱、凈化樣品、使用HIPLC級(jí)試劑;偶然有噪聲時(shí)，可能是來(lái)自電源的干擾，如果電壓不穩(wěn)時(shí)，應(yīng)采用穩(wěn)壓電源。
5.肩峰或分叉
進(jìn)樣量太大或樣品濃度過(guò)高時(shí)，要減少進(jìn)樣量或稀釋樣品;樣品溶劑太強(qiáng)時(shí)，應(yīng)使用軟弱的樣品溶劑;色譜柱性能欠佳時(shí)，應(yīng)更換色譜柱。
6鬼峰
色譜柱未達(dá)到平衡時(shí)，要繼續(xù)平衡色譜柱;樣品中溶劑出峰時(shí)，使用流動(dòng)相作樣品的
溶劑;出現(xiàn)進(jìn)樣閥殘余峰時(shí)，使用強(qiáng)溶劑清洗進(jìn)樣閥，并改進(jìn)閥和樣品的清洗程序;流動(dòng)相用水不合格率，應(yīng)使用HPLC級(jí)的水。
使用注意事項(xiàng)
在使用混合溶劑作流動(dòng)相時(shí)，一定要先混合，再過(guò)0.45um濾膜;等流動(dòng)相恢復(fù)至室溫，用超聲波或He氣進(jìn)行脫氣處理后，方可使用。
更換流動(dòng)相時(shí)，必須按一定的程序進(jìn)行，否則會(huì)產(chǎn)生問(wèn)題。更換流動(dòng)相有三種情況：互溶性流動(dòng)相的更換、無(wú)互溶性流動(dòng)相的更換和緩沖溶液的更換。對(duì)于*種情況，先用準(zhǔn)備更換的流動(dòng)相把吸濾器*清洗干凈，再打開(kāi)儀器的排液閥，按清洗鍵，清洗泵中的流動(dòng)相。
將吸濾器放入新流動(dòng)腥中，減慢流速清洗數(shù)分鐘后關(guān)閉排液閥。接下來(lái)清洗色譜柱和檢測(cè)器檢測(cè)池直到基線平穩(wěn)。對(duì)于第二種情況，先用與新舊流動(dòng)相都互溶的中間清洗液（如：異丙醇）清洗，再用新流動(dòng)相清洗，具體過(guò)程與*種情況相同。對(duì)于第三情況，應(yīng)先用蒸餾水作為中間清洗液進(jìn)行清洗，再用新流動(dòng)相清洗即可。
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關(guān)鍵字：色譜柱 柱溫 液相色譜儀 互溶性 有機(jī)相
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